高效液相色譜從原理上與經(jīng)典的液相色譜沒(méi)有本質(zhì)的差別,它的特點(diǎn)是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測(cè)器和高效微粒固定相,適于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)、分子量大、不同極性的有機(jī)化合物。
使用高效液相色譜時(shí),液體待檢測(cè)物被注入色譜柱,通過(guò)壓力在固定相中移動(dòng),由于被測(cè)物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不同,不同的物質(zhì)順序離開(kāi)色譜柱,通過(guò)檢測(cè)器得到不同的峰信號(hào),最后通過(guò)分析比對(duì)這些信號(hào)來(lái)判斷待測(cè)物所含有的物質(zhì)。高效液相色譜作為一種重要的分析方法,廣泛地應(yīng)用于化學(xué)和生化分析中。
高效液相色譜跑梯度如何平衡基線(xiàn)?
首先,當(dāng)梯度完成時(shí),基線(xiàn)漂移是正常的,但是基線(xiàn)漂移的嚴(yán)重性可以通過(guò)以下措施來(lái)改善:
1.梯度前,最好用純有機(jī)溶劑沖洗高效液相色譜柱,或使用新高效液相色譜柱,以防止高效液相色譜柱中的殘留物導(dǎo)致基線(xiàn)漂移。
2.試劑純度優(yōu)選為普通色譜純?cè)噭?。如果純度不夠,梯度過(guò)程中也會(huì)出現(xiàn)基線(xiàn)漂移。
3.控制室或柱溫,防止溫度波動(dòng)
4.注射前,進(jìn)行溶劑空白試驗(yàn)。如果基線(xiàn)漂移嚴(yán)重,可使用該空白進(jìn)行扣除,基線(xiàn)漂移將得到改善。