液相色譜儀分配系數(shù)與組分、流動相和固定相的熱力學性質(zhì)有關,也與溫度、壓力有關。在不同的色譜分離機制中,K有不同的概念:吸附色譜法為吸附系數(shù),離子交換色譜法為選擇性系數(shù)(或稱交換系數(shù)),凝膠色譜法為滲透參數(shù)。但一般情況可用分配系數(shù)來表示。
高效液相色譜儀的記錄樣品通過檢測器吸光度變化引起的電信號變化,從而產(chǎn)生色譜圖,最終結(jié)果取決于后期色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)的數(shù)據(jù)處理。以下是兩種常用的高效液相色譜儀數(shù)據(jù)處理方法。光譜處理后可以制作校正曲線。校正曲線是數(shù)據(jù)處理的重點。它是一個標準,使信息和數(shù)據(jù)的標準光譜圖處理樣品光譜圖。高效液相色譜儀的校正是通過分析制備的標準樣品來確定計算絕對組分濃度的響應系數(shù)的過程。
1.外標法:外標法是在空白樣品中加入一定量的標準物質(zhì)作為對照樣品,與未知樣品同時進行樣品處理和檢測,并計算出被檢測成分的濃度的定量方法。根據(jù)對照品響應值與標準品濃度函數(shù)的關系,測定未知試樣中的成分。
2.內(nèi)標法:內(nèi)標法是將一定重量的純物質(zhì)作為內(nèi)標物加入一定量的被測樣品混合物中,對含有內(nèi)標物的樣品進行高效液相色譜儀分析,測定峰面積和相對含量。分別測定內(nèi)標物和受試物的有效校正系數(shù),并按公式計算受試物的含量。
兩種適合的數(shù)據(jù)處理方法的差別為高效液相色譜儀:內(nèi)部標準方法是將標準的標準物質(zhì)作為要求的內(nèi)部條件,并以合適的操作條件對樣品進行嚴格的試驗和試驗結(jié)果的檢驗,但對樣品的精確操作條件和試驗結(jié)果的分析必須是嚴格的,而對樣品的內(nèi)部標準則不需要對樣品進行嚴格的校正。